新品介绍—重组酶聚合酶扩增反应(RPA)

发布日期:
2022-06-27
RPA


核酸体外扩增是分子生物学、遗传学、医学等研究领域最常用的技术之一。其中聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以及在此基础上发展的多重PCR、单分子PCR、实时荧光定量PCR等技术使用最为广泛,但这些技术均依赖于控温准确的热循环仪器,限制了其在临床现场检测中的应用。


核酸恒温扩增技术由于不需反复热变性,无需特殊仪器,反应速度更快,适合现场快速检测,在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。


新品介绍—重组酶聚合酶扩增反应(RPA)




德奥平生物重组聚合酶等温扩增关键原料

德奥平生物规模化发酵

GMP规格的产房生产条件

严格的13485质量管理

欢迎咨询订购!


新品介绍—重组酶聚合酶扩增反应(RPA)


新品介绍—重组酶聚合酶扩增反应(RPA)





01.

 RPA重组酶聚合酶扩增技术是什么呢?



新品介绍—重组酶聚合酶扩增反应(RPA)

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就会发生链交换反应形成并启动DNA合成,对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合,防止进一步替换。在这个体系中,由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快,一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。



02.

 RPA技术也要依赖这三种酶



能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶: 负责结合引物并替换模板链;

单链DNA结合蛋白(SSB): 结合被替换链并防止其进一步被替换;

链置换DNA聚合酶: 负责DNA链的合成。

这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37°C左右。



03. 

依赖后有了特性的RPA,超抢手



速度快,RPA在37~42°C的最佳反应温度下,通常可以在3~10分钟内将核酸样本被扩增到可检测的水平。在许多情况下,一个没有经过专业培训的操作员,在半小时内就能完成取样、准备样品、运行检测并获得结果。


检测灵敏度高,RPA可以检测复杂样品中的DNA单个拷贝和RNA数十个拷贝或更少,通常无需事先进行核酸纯化。


特异性高,RPA是如此特异,以至于该技术可以检测和扩增复杂样本中存在的单拷贝DNA分子,该样本可能含有数百纳克来自多种多样物种(包括人类DNA)的无关复杂DNA。


无需昂贵的配套设备,qPCR采用的是Taq DNA聚合酶,其实现扩增必须经过95°C、60°C的温度循环,而RPA为恒温反应,一个水浴锅即可完成,因此其检测方法无需复杂昂贵的温控设备,更为方便快捷。


耐受性好,RPA对样本类型非常宽容,在某些情况下可以直接作用于复杂的样本,如血液、鼻腔拭子或培养基,这些样本无需经过核酸纯化。


适用性广泛,RPA可以很容易地应用于任何DNA或RNA靶标。可以通过向反应混合物中添加逆转录酶来开发超高灵敏度的一管式RNA检测分析。


可做多重检测,通过在同一反应管中组合多个引物,单次RPA试验可用于多个不同目标的扩增和检测。


检测方法多种多样,RPA可以应用于多种检测系统和仪器,包括荧光、探针、检测试纸条等。



04. 

RPA反应扩增产物检测方式



RPA扩增产物可以通过多种方式检测,如结合化学发光检测表面增强拉曼散射等方式检测RPA扩增产物,其中最经典的3种检测方式为实时荧光检测侧向层析试纸条检测反应(lateral flow dipstick,LFD)凝胶电泳检测。



05. 

RPA技术应用领域



  • 绝对定量

  • 病原微生物检测

    病毒检测

    细菌检测

    真菌检测

    寄生虫检测

  • 基因突变检测

  • 融合基因检测

  • 食品安全检测


参考文献:景志刚董浩狄栋栋田莉莉范伟兴重组酶聚合酶扩增技术研究进展[J]. 生物技术通报, 2016, 32(6): 47-53




相关推荐

双十一温情回馈!领取属于你的专属暖心礼!
双十一专场温情回馈重要的节日德奥平生物从不缺席双十一温情回馈...
探究体外诊断生物活性原料-抗原的研发与制备过程
体外诊断是临床诊断信息的重要来源,是保证人类健康的医疗体系中...
限时秒杀 · 钜惠来袭 | 德奥平优势原料PGI/PGII天然蛋白强烈推荐
详情即日起两个月内(2022年9月9日-2022年11月9日...