当LNA探针遇上基因突变检测，“锁”定实验不翻车！

发布日期：

2023-06-07

师妹：“师姐，单碱基突变检测为什么老出现假阳性？你有什么好办法吗？”

师姐：“师妹，我猜你还没有用过锁核酸LNA探针吧？是这样的，常规的单碱基突变检测方法有Sanger测序法、等位基因特异性PCR、高分辨率溶解曲线分析法、scorpion ARMS、ARMS-PCR、第二代测序、BEAMing技术以及数字PCR技术等。然而，有的突变检测灵敏度不够高，有的价格昂贵，无论是样品制备还是具体操作都比较麻烦费时费力。但是，如果在一般的ARMS PCR的基础上引入不同数目的LNA锁核酸探针，那么每增加一个LNA，Tm值提高3-9℃_[2]，则可非常有效的增强其检测灵敏度啦！”

师妹：“这个方法确实很不错，师姐能不能给我讲讲呀！？”

锁核酸 LNA

锁核酸（locked nucleic acid，LNA）是一种寡核酸衍生物，它与DNA、RNA具有相似的磷酸盐骨架，其核糖2’O原子和4' C之间通过缩水作用，以亚甲基桥键相连，从而形成双环结构。该环形结构可以降低核糖的柔韧性，进而增强了磷酸盐骨架稳定性。

当LNA探针遇上基因突变检测，“锁”定实验不翻车！

LNA遵循Watson-Crick配对原则，能够与互补的LNA、单链DNA、RNA形成高亲和力的杂交物，可以降低或阻断转录翻译过程。除此之外，还能在中性条件下和双链DNA结合形成三股螺旋寡核苷酸而影响基因的表达_[1]。

高效赋能 · 基因突变精准检测

locked nucleic acid,LNA

基因突变是癌症产生的最重要因素之一，但肿瘤相关的基因突变通常是隐藏于大量野生型基因中，传统的检测方法难以精准检测，而利用LNA与DNA的杂交亲和性可以进行突变基因的痕量检测。由于LNA在进行互补配对时对错配碱基具有更强的识别性，如果LNA-DNA中含有错配碱基，则其杂交链的稳定性下降。利用这一优势，在进行探针修饰时，如果将LNA修饰于错配位点或者其附近，则可以很好的识别这些单碱基错配，大大提高检测的特异性和精准度。

德奥平LNA探针合成服务

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可根据客户的设计序列或LNA修饰要求，如修饰位点、数量、磷酸化需求提供定制化寡核酸合成服务。

✓ 可在单条序列中添加多个LNA碱基。

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LNA

高专一 · 高稳定

双重质控

序列ASOLNA-P

(LNA-T)*(LNA-T)*(LNA-G)*A*A*C*C*G*T*C*C*C*T*T*C*T*(LNA-C)*(LNA-C)*(LNA-C)

Mass质谱-分子量6149.2

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UPLC检测-纯度99.25%

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德奥平引物及探针合成产品

当LNA探针遇上基因突变检测，“锁”定实验不翻车！

图片来源：Kamali M J , Salehi M , Fatemi S , et al. Locked nucleic acid (LNA): A modern approach to cancer diagnosis and treatment[J]. Experimental cell research, 2022, 423(1):113442.

参考文献：

[1]. Obika S, Hari Y, Mofio K, et al. Triplex formation by an oligonucleotide containing conformationally locked C-nucleoside, 5-(2-O,4-C-methylene-β-d-ribofuranosyl)oxazole[J]. Tetrahedron Letters, 2000.

[2].Singh S K , Wengel J . Universality of LNA-mediated high-affinity nucleic acid recognition[J]. Chemical Communications, 1998(12):1247-1248.

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