TaqMan 探针法实时荧光定量PCR—临床诊断“金标准”

发布日期:
2022-05-13

实时荧光定量 PCR 是在传统 PCR基础上加入信号系统达到实时监测 PCR 扩增的目的,继承了传统PCR高灵敏度和操作简便的特点,同时实现了对样本的定量检测。根据信号基团的不同,实时荧光定量 PCR 可以分为染料法探针法。非特异的染料法成本较低,但面临着类似于普通 PCR 非特异性扩增产物干扰的假阳性问题。探针法中使用的探针多是 TaqMan 探针,与染料法相比,在一定程度上避免了假阳性问题的出现。

 

TaqMan 探针法实时荧光定量PCR 因其重复性好、特异性强、线性范围宽等特点在各个领域有着广泛的应用, 内标系统的引入进一步提升了该方法的灵敏度,增加了其可靠性和实用性。


TaqMan 探针是利用扩增过程中Taq酶的 5’核酸外切酶活性切割与靶序列结合的寡核苷酸探针,探针5’端标记荧光报告基团3’端标记荧光淬灭基团并被磷酸化以防止探针在PCR过程中延伸,引物延伸至寡核苷酸结合位置时,Taq 酶可以将其切割成小片段,使报告基团和淬灭基团分开并发出荧光经过检测伴随扩增产物增加过程中荧光强度的增长对样本进行定量分析。现阶段使用的荧光报告基团有HEX、FAM、ROX、JOE、VIC等,荧光淬灭基团主要有TAMRA、BHQ 等。研究发现,BHQ本身具有非常低的荧光背景,实用性高于TAMRA。

TaqMan 探针法实时荧光定量PCR—临床诊断“金标准”


常见的报告基团和猝灭基团的组合形式。

 

猝灭基团

报告基团

TAMRA

FAM、HEX、TET、JOE等

Ecllpse

FAM、HEX、TET、JOE、TAMRA、ROX等

BHQ/MGB

FAM、HEX、TET、JOE、TAMRA、ROX、CY3、CY5等

TapMan猝灭基团和报告基团的组合形式


TaqMan探针法qPCR优点

01
特异性高、定量准确

从原理可以看出,荧光探针只与目的序列结合,理论上探针法的荧光信号只来源于目的序列,即不受非特异性产物的影响,因此,TaqMan探针法qPCR的特异性非常高,定量准确。

02
实验耗时短

因探针法qPCR的高特异性,故无需再设置熔解曲线检测扩增产物的特异性如何,大大缩短了实验时间。

03
兼容多重反应

不同波长的荧光报告基团可以标记不同的探针,因此可以在同一个反应体系中利用不同荧光标记的探针同时检测多个靶标,达到节省实验成本的目的。

TaqMan 探针的应用



医药卫生方面的应用

TaqMan 探针法用于乙肝病毒检测时,除了可以实现定量外,还可以对 HBV 进行基因 分型和 YMDD 突变检测,其测定结果与直接测序法符合率较高,并且操作相对简单。


肿瘤基因检测和药物研究

TaqMan 探针法对白血病患者体内融合基因含量和标准化水平进行了探讨,TaqMan 探针技术不仅能够精确定量基因表达水平,还可以评价影响 PCR 的因素,极大地提升了 PCR 技术在血液病诊断和疗效监测上的应用。


基础医学研究

实时荧光定量 PCR技术不仅可以实现环境微生物群落变化的动态预测和生理代谢研究,还可以用于微生物群落特性的探讨和生存条件的优化,并可与其他分子生 物学技术相结合,为微生物学研究开辟了更光明 的道路。


医药卫生方面的应用

TaqMan 探针法用于乙肝病毒检测时,除了可以实现定量外,还可以对 HBV 进行基因 分型和 YMDD 突变检测,其测定结果与直接测序法符合率较高,并且操作相对简单。


农业科学、工业技术等其他方面的应用

TaqMan 探针技术在动物学如家禽病毒感染检测、植物学如植物保护和植物基因鉴定、水产渔业等方面已经得到了普遍的应用。



德奥平生物拥有先进的自动化生产设备及质量检测设备,可以满足不同客户对产品规模化、高通量的合成需求采用真核苷酸商业工业化生产工艺及,按照ISO13485:2016严格质量管理体系对产品生产进行全流程控制确保为客户提供稳定、高质量的引物及探针合成服务。


德奥平生物提供TaqMan 探针合成服务

产品类型

修饰类型

双标探针类

5'FAM 3'TAMRA

5'FAM 3'BHQ1

5'FAM  3'Dabcyl

5'FAM 3'MGB

5'FAM  3'Eclipse

5'HEX 3'BHQ1

5'HEX 3'TAMRA

5'HEX  3'Eclipse

5'HEX  3'Dabcyl

5'HEX 3'MGB

5'ROX 3'BHQ2

5'ROX 3'MGB

5'Cy5 3'BHQ2

5'Cy5 3'BHQ3

5'CY5 3'MGB

5'Cy5.5  3'BHQ3

5'TET 3'BHQ1

5'TET 3'TAMRA

5'VIC  3'Dabcyl

5'VIC 3'BHQ1

5'VIC 3'TAMRA

5'VIC 3'MGB

同时还提供其它修饰类型

TaqMan 探针法实时荧光定量PCR—临床诊断“金标准”


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