定制化学合成sgRNA - 北京德奥平生物技术有限公司

定制化学合成sgRNA

SgRNA(single guide RNA)：单向导RNA，是一种单链RNA分子。SgRNA是CRISPR-Cas9基因编辑系统中的关键组分，它能够引导Cas9蛋白识别并切割特定的DNA序列。通过与Cas9蛋白结合，形成Cas9-SgRNA复合物，再识别并结合到靶DNA序列上，导致DNA双链断裂，从而实现基因编辑。由于靶向灵活、编辑效率高、操作简便等特点正广泛应用于体外/体内CAR-T、基因改造、药物开发、体内基因编辑等领域。通过体外转录和化学合成两种方式可获得特定序列的sgRNA。经过良好设计的sgRNA，往往是CRISPR基因编辑实验成功的关键因素之一。

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常见问题FAQ

传统sgRNA的问题：如体外转录等产生的sgRNA，其制备的成功率不稳定，且由于带有磷酸化修饰产生细胞毒性和免疫反应，因此在使用上有一定的局限性。

化学合成sgRNA的显著优势：有效避免传统sgRNA的问题，同时具有以下优势：

● 纯度更高

● 编辑效率更高

● 细胞毒性更低

● 脱靶副作用更低

● 灵活选用修饰方式，体内更稳定批次间一致性好

德奥平定制化学合成sgRNA

德奥平定制化学合成SgRNA

德奥平生物已建立成熟的化学合成sgRNA平台，可为您提供高纯度、更稳定、低毒性、快速交付的定制sgRNA合成服务，是解决基因编辑效率低、时间与人力成本高等难题的不二之选。

行业领先的合成能力

✓ 合成长度为93-103nt

纯化方式多样，纯度高

✓ 脱盐纯化约40-50%

✓ HPLC纯化>90%

灵活修饰，提升稳定性与编辑效率

✓ 德奥平在sgRNA的3'端与5'端各添加3个硫代和甲氧基修饰，最大程度提高了sgRNA的稳定性，延长体内半衰期，防止其被体内的核酸外切酶降解。相比没有化学修饰的sgRNA，化学修饰可显著提高CRISPR系统的编辑效率。

严苛质控管理体系

✓ 每条sgRNA均进行质谱检测以保证序列的100%准确。

稳定合成工艺，保证批间差

交付周期快，降低时间成本：5-7天

德奥平sgRNA合成服务案例

化学合成的sgRNA是一段97-103碱基的RNA序列，其中包含一个17-23碱基的引导序列(Spacer)和一个80个核苷酸的骨架序列(scaffold)，引导序列与目标DNA互补，决定靶向特异性。骨架序列(scaffold)与Cas蛋白结合，形成sgRNA-Cas9复合物，激活Cas9的靶向和切割。

化学合成的sgRNA两端各含有3个2′-O-甲基核苷酸并硫代磷酸酯键修饰，以提高提高RNA化学稳定性，延长体内半衰期，显著提高CRISPR系统的编辑效率，如下图：

序列 sgRNA Sequence

(mA)* (mU)*(mG)*UCACAGACAAGUACUCCGUUUUAGAGCUAGAAAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUGCUUU*(mU)*(mU)*(mU)

Mass质谱 - 分子量32947.7