基因克隆-多片段无缝克隆试剂盒

基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据DNA片段与线性化载体末端的15~25nt同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点。

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货号	产品名称	中文名称	规格	目录价（元）
DC00101	多片段无缝克隆试剂盒	多片段无缝克隆试剂盒	25 rxns	888

基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据DNA片段与线性化载体末端的15~25nt同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点，载体自连背景极低，是一种简单、快速、高效的DNA定向克隆技术。

1.高效一次反应可完成单至多个DNA片段的重组

2.快速最快仅需5分钟即可完成单片段重组

3.阳性率更高高于95%；Mix中添加的辅助因子，有效提高克隆阳性率

4.兼容性更好经优化的反应体系，能够一定程度上耐受未纯化PCR产物中含有的杂质

问题描述	原因	解决方法
转化效率低	DNA片段比例不佳	使用新制备或妥善保存的感受态细胞。
	DNA片段纯度不够	按照说明书推荐的最适用量和比例配制反应体系。载体和插入片段的浓度测定：若线性化载体与插入片段已经过纯化，且经电泳检测条带单一或无Smear残留时，可使用超微量核酸蛋白检测仪等基于分光光度法的仪器进行浓度测定，但只有当A260/A280在1.8~2.0之间时浓度值可信；若线性化载体与插入片段未经过纯化，也可使用琼脂糖电泳测定样品浓度。
	反应产物过量	对载体和插入片段进行胶回收纯化。由于EDTA等金属离子螯合剂会抑制无缝克隆反应，因此纯化产物应溶解于ddH2O中，切勿使用Tris-EDTA等缓冲液。
	反应产物过量	对载体和插入片段进行胶回收纯化。由于EDTA等金属离子螯合剂会抑制无缝克隆反应，因此纯化产物应溶解于ddH2O中，切勿使用Tris-EDTA等缓冲液。
大量克隆不含插入片段	载体线性化不完全	酶切制备线性化载体时，提高快速内切酶的使用量延长反应时间，使用胶回收纯化酶切产物。
	相同抗性质粒污染	以质粒为模板进行插入片段PCR扩增时，使用预线性化质粒作为扩增模板，使用DpnI等甲基化敏感型内切酶对扩增产物进行处理，或对产物进行胶回收纯化。
	平板抗性不足	确保使用正确的抗生素，并使用新鲜制备的抗生素平板。
大量克隆含有不正确插入片段	非特异性PCR扩增产物	优化PCR体系，提高扩增特异性，或胶回收纯化PCR产物重叠序列的扩增引物。

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